ПЦР-диагностика

ПЦР (PCR) или полимеразная цепная реакция – это один из самых точных методов лабораторной диагностики различных инфекций, в том числе ИППП (инфекций, передающихся половым путем). ПЦР диагностика позволяет выявлять возбудителя, даже если биологический материал содержит всего несколько его молекул ДНК или РНК.

Базовый принцип ПЦР

Принцип диагностики базируется на выделении из двойной спирали ДНК участка с конкретным геном, фрагментом ДНК, многократном увеличении его количества (амплификация) и дальнейшем изучении.

Амплификацию стимулируют специальные ферменты. Они позволяют получить количество ДНК, которого бывает достаточно для обнаружения возбудителя (вируса, бактерии) или иного анализа. Ферменты воздействуют только на тот участок, который отвечает заданным параметрам. Удваивание ДНК происходит только при их наличии в материале, который подвергают исследованию.

Такой лабораторный тест широко применим в медицине и биологии для проведения анализов и в научных экспериментах. ПЦР-анализ делают в рамках диагностики инфекций, наследственных патологий, для установления отцовства, выведения новых генов и их клонирования.

Преимущества и недостатки метода

К преимуществам ПЦР диагностики можно уверенно отнести ее безусловную универсальность. PCR обнаруживает тип ДНК/РНК даже при неэффективности других методов. При этом в медицинской лаборатории используют универсальное оборудование, независящее от вида генетического материала и разновидности вируса, который предстоит найти. В числе прочих плюсов:

• Высокая специфичность метода, достигающая 100%. В исследуемом биологическом образце удается выявить уникальную последовательность нуклеотидов, сопряженную с возбудителем. Полученный материал можно исследовать одновременно на наличие нескольких возбудителей без снижения качества результата диагностики;
• Высокий уровень чувствительности. ПЦР-тест позволяет выявить конкретного возбудителя, даже если в пробнике присутствует только одиночная молекула ДНК/РНК;
• Оперативность. Чтобы установить реакцию, достаточно 3-4 часов. Получить результаты лабораторной диагностики пациент может в течение 1-2 дней после сдачи биологического материала;
• Эффективность. ПЦР выявляет некультивируемые, трудно культивируемые и латентно «обитающие» формы патогенных организмов. Однако полимеразная цепная реакция может обозначить только провокатора заболевания, но не реакцию на его контакт с организмом человека;
• Возможность проведения количественного анализа.

Минус анализа – это высокие требования к оборудованию и квалификации специалистов.

Исследование предполагает строгое соблюдение правил и серьезное оснащение лаборатории. Кроме этого, тест предъявляет высокие требования к чистоте образца. Если в пробу попадет посторонний агент, есть риск получения ложноположительного результата.

Лаборанты не исключают и вероятность амплификации ДНК мертвых микроорганизмов. Пациент уже выздоровел, а молекулы уже погибшего возбудителя все еще остаются в его организме – оборудование определяет их и демонстрирует ложный результат.

Следует также сказать о неопознанных инфекциях, мутациях. Нельзя исключать наличие в биоматериале микроорганизмов, для которых не были разработаны праймеры. Возбудители склонны непрерывно мутировать, приспосабливаясь к разным лекарственным препаратам. Следовательно, праймеры перестают быть актуальными, поскольку уже не соответствуют прототипу.

Показания к тесту

Поскольку ПЦР – широко распространенный, быстрый и надежный метод лабораторной диагностики, в медицине его применяют в различных областях, например:

• диагностирование половых инфекций (ВИЧ, гепатит, TORCH-инфекции и пр.);
• урогинекология (ПЦР анализы на скрытые инфекции);
• неонатология (лабораторная диагностика внутриутробных инфекций – герпеса, краснухи, токсоплазмы и пр.).

Тест сдают при необходимости обнаружить конкретный подозреваемый патогенный микроорганизм в рамках диагностирования лейкоза, прочих злокачественных опухолей, некоторых генетических патологий, исследовании образца биопсии, который не получается изучить иным путем.

В 2020 году ПЦР-исследование стало актуально как никогда. ПЦР-анализ – самый точный способ распознавания коронавирусной инфекцией (COVID-19), которая стала причиной пандемии.

Какие инфекции диагностируют методом ПЦР?

Лабораторный тест выявляет даже бессимптомные заболевания, находящееся в инкубационном периоде, например:

• гепатит С, В;
• молочницу;
• бактериальный вагиноз;
• ЗППП;
• туберкулез;
• трихомониаз;
• хламидиоз половых путей и пр.

При выявлении этих и других заболеваний альтернативным методом желательно сделать и тест ПЦР. Возбудители инфекций имеют штаммы, детальная диагностика позволит сделать лечении наиболее эффективным.

Какие биологические материалы исследуют?

В качестве исходного материала для исследования могут быть использованы:

• кровь, плазма, сыворотка - материал берут при диагностике гепатитов, выявлении вируса герпеса, ВИЧ;
• моча - необходима при наличии симптомов инфекционного поражения мочеполового мужского тракта и мочевыделительных женских органов;
• эпителиальный соскоб - его делают при подозрении на развитие ИППП, которые поражают слизистые оболочки половых органов мужчин и женщин;
• мокрота - используется в рамках диагностирования туберкулеза, редко – респираторного хламидиоза, микоплазмоза;
• иные биологические жидкости (слюна, сперма, околоплодная, спинномозговая, плевральная жидкости);
• биоптаты - обычно исследованию подвергают биоптаты желудка, двенадцатиперстной кишки в рамках диагностики хеликобактерной инфекции.

Как подготовиться к базовым анализам?

Перед сдачей анализа пациенту нельзя принимать антибактериальные препараты, противовирусные средства и прочие лекарства, которые влияют на микрофлору. Игнорирование рекомендации может привести к ложноотрицательному результату.

Перед сдачей мазков и соскобов со слизистых половых органов не следует подмываться бактерицидными составами: они способны смыть патогенные микроорганизмы. Женщинам врачи советуют не спринцеваться и не вводить в половые пути лекарственные средства. Биологический материал у женщин не собирают во время месячных. При сдаче анализа на ЗППП за два дня до процедуры необходимо отказаться от секса. Если предстоит сдавать мазки и соскобы из уретры, не следует мочиться на протяжении 2-3 часов до процедуры.

Анализы крови необходимо сдавать натощак, поэтому последний прием пищи должен быть за 8 часов до прихода в лабораторию. Исключите употребление слишком жирной, острой, калорийной пищи, алкогольных напитков перед сдачей крови. Перед исследованием рекомендовано исключить эмоциональные и физические нагрузки.

Моча, семенная жидкость собирается в специальные стерильные контейнеры. Срок хранения и транспортировки биоматериала – не более двух часов.

Слюну предстоит собрать после трехчасового воздержания от еды, питья. Можно только полоскать рот чистой водой. Непосредственно перед процедурой пациенту необходимо помассировать слюнные железы.

Другие, редко применяемые биоматериалы собирают исключительно в клинике, в которой и будет производиться исследование. Детализированную инструкцию по подготовке к анализу можно получить у лечащего врача.

Порядок проведения исследования ПЦР

Сегодня практикуют несколько методик теста. Рассмотрим их чуть подробнее:

• Обратная транскрипция. Популярная методика определения известной последовательности РНК, которая подразумевает удвоение, выявление патогена и его соотношение с образцами, принадлежащими научной картотеке.
• Вложенная полимеразная цепная реакция. Предполагает применение двух разновидностей праймеров и проводится в два этапа.
• Изотермические методики. Не сопряжены с повторяющимися температурными циклами, не такие энергозатратные.
• Инвертированная полимеразная цепная реакция. Применима при наличии короткого фрагмента заданной последовательности. Обязывает обозначить соседние последовательности после того, как в геном будет помещена ДНК.
• ПЦР в реальном времени. Способ обозначает присутствие не только целевой последовательности в биоматериале, но и определяет число копий молекул после каждого приумножения.

Этими методами не ограничивается разнообразие технологий анализа. Наука продолжает развиваться в этом направлении, открывая новые методики PCR.

Расшифровка результата

Анализ определяет провокатора и обозначает количественный показатель – концентрацию микробов. Количественный результат особенно важен при определении эффективности проводимой терапии многих хронических болезней (гепатита С).

На руки больной получает положительный или отрицательный результат теста:

• Отрицательный. Признаки инфекции не были обнаружены на молекулярном уровне. Это значит, что пациент здоров;
• Положительный. Во время исследования в биоматериале были обнаружены следы инфекции. Пациент болен.

Иногда положительный ответ получается на фоне отсутствия симптомов болезни, полного выздоровления человека. Однако это не говорит о том, что тест проведен неправильно. Если в лаборатории был выявлен провокатор инфекции, значит, он действительно присутствует в организме человека. Ряд заболеваний не развиваются до окончания инкубационного периода, который бывает весьма продолжительным. Так, СПИД имеет инкубационный период в несколько лет. Инфекционный агент будет присутствовать и в биоматериале пациента, который не окончил лечение.

Насколько точен тест?

Анализ отличается высокой точностью. Он также специфичен и чувствителен. PCR дает возможность:

• определить, присутствует ли в организме больного инфекционный агент;
• обозначить вид возбудителя инфекции;
• диагностировать болезнь даже при латентном ее течении – присутствии в пробнике минимального количества молекул.

Полимеразная цепная реакция намного эффективнее и точнее прочих исследований, поскольку гораздо реже ошибается. Это значит, что при расшифровке теста он гораздо реже показывает отсутствие микробов в пробнике при их фактическом наличии. PCR крайне редко демонстрирует и ложноположительный результат – обнаруживает инфекционных агентов там, где их нет. Дать 100% гарантию точности теста нельзя, поэтому иногда проводят дополнительные исследования.

Вывод

ПЦР диагностика – эффективный инструмент лабораторной диагностики. Он позволяет быстро и точно определить возбудителя многих инфекций. Чаще всего ПЦР-исследование проводят при подозрении на развитие заболеваний, передающихся половым путем. При этом в клинике есть возможность сдать сразу готовый набор PCR на ИППП, комплексные анализы. В таком случае для забора биоматериала делают урогенитальный мазок.

Положительный ответ теста – это не повод паниковать, однако стоит обратить пристальное внимание на свое здоровье.

Почему стоит обратиться «ДНК-клиника»?

Достойное техническое оснащение лаборатории позволяет нам проводить более 4 сотен разных анализов. Врачи медицинского центра подбирают для пациентов эффективные комплексные диагностические программы, которые дают возможность поставить точный диагноз или опровергнуть предположения. «ДНК-клиника» - это:

• опыт и надежность – мы работаем с пациентами больше 15 лет;
• высокая квалификация специалистов – большинство сотрудников клиники имеют высшую и первую квалификационные категории;
• корректность забора – забор биологического материала производится в строгом соответствии нормам и правилам;
• гарантия контроля качества – практикуем систему двойной проверки результатов тестов;
• доступные цены.

Для записи на диагностику позвоните нам или заполните форму на официальном сайте медицинского центра.